编者按：近年来，斑马鱼Crispant技术作为基因编辑领域的一项重要创新，凭借其高效性、低成本和操作简便等特点，成为疾病机制研究、药物筛选及功能基因组学的理想工具，并在未来的精准治疗中展现出更大的潜力。Crispant技术的核心在于利用CRISPR/Cas9技术，通过将Cas9蛋白和靶点gRNA混合（RNP）注射到斑马鱼的1细胞期，生成F0代敲除嵌合体斑马鱼（整体敲降），并直接用于表型观察和基因功能研究。

相较于传统的m啡啉介导的基因敲降技术，Crispant技术具有以下优势：

1. 研究周期短

最快2周即可观察到胚胎期的表型，一般在4周内能提供包括靶点效率验证的完整研究报告。

2. 全生命周期表型观察

Crispant技术可在斑马鱼发育的任何阶段进行表型观察，而m啡啉的效果随着胚胎的发育而逐渐减弱，通常只能用于1周内的胚胎表型观察。Crispant实现的基因敲降使得基因的影响可持续到成年期。

3. 低毒副作用

m啡啉可能引发毒副作用，从而导致非靶向基因的表型变化，常需同时合成两条m啡啉以增加结果的可靠性。而Crispant技术的毒副作用较低，可以设计和筛选多个高效且特异的靶点，通过共同注射实现基因的完全敲除。

4. 可同时敲降多个基因

Crispant能够同时针对多种基因进行敲降，避免了使用两条m啡啉时可能导致的胚胎致死或非特异性表型出现。

5. 简化稳态品系构建

通过Crispant筛选出的靶点，可以直接用于稳定敲除斑马鱼品系的构建，从而节省时间和成本。

应用场景

Crispant技术通过多重sgRNA协同编辑和F0代表型直筛，使基因功能研究的周期缩短至传统方法的1/5，成本也降低了50%以上。这种高效性、低成本与简便操作，使其成为疾病模型构建、基因功能研究及药物筛选的理想选择。

1. 疾病模型构建

已有研究利用Crispant技术构建癫痫模型，通过敲除irf2bpl或cars2基因，模拟患者的抽搐表型，以便筛选抗癫痫药物，如丙戊酸。此外，还用于凝血障碍模型的构建，敲除adcyap1b基因可导致凝血因子下调，表现出自发性出血，适用于抗血栓药物的评估。

2. 基因功能解析

研究显示，敲除kctd10基因可以诱导心脏线性畸形，为心脏发育研究提供了新的思路；同样，通过rfx6的敲除也能诱导糖尿病表型，进而用于胰腺功能的研究。

3. 药物筛选

已有通过敲除斑马鱼cars2、Sigirr、cbsb基因等，诱发相关表型，用于神经系统疾病、抗感染与免疫调节、代谢与罕见病、肿瘤个性化等药物筛选。

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